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色谱指纹图谱分析技术用于鉴别中药川芎产地
[摘要] 目的:研究用于鉴别川芎产地的色谱指纹图谱分析技术。方法:用HPLC获得川芎药材的色谱图,从中提取15个色谱峰,再用主成分分析、聚类分析、相似度计算以及Fisher因子分析等方法进行考察。结果:不同产地川芎的色谱西装热裤指纹图谱存在明显的差异,所提取的15个色谱峰可用作指纹特征。结论:色谱指纹图谱分析技术可用于川芎药材的产地鉴别。
[关键词] 中药;川芎;色谱指纹图谱;中药质量控制
川芎为伞形科植物的干燥根茎,始载于《神农本草经》,列为上品。《图经本草》指出:“以蜀川为胜”,故名川芎。川芎主产于四川灌县、重庆和都江堰市等地,以灌县产为最佳,在江西、湖北及云南等地亦有栽培,其中江西所产也称抚芎,云南所产也称云芎。不同产地川芎的药效并不完全相同,清宫医案中就已将川芎和抚芎区别使用,御医临证处方颇有不同[4]。目前,市场上不翻斗车同产地的川芎很容易混淆,使用者多据性状鉴别,这对经验依赖性强。本文用高效液相色谱对川芎的水溶性化学组分进行检测,提取谱图中15个色谱峰作为指纹峰,用聚类分析、主成分分析及相关主成分分析进行考察,并用相似性度量方法定量鉴别。研究结果表明,这-Q个色谱指纹峰组成的指纹特征可用于鉴别川芎的一些产地。
1 实验部分
1.1 生药样品来源
由全国各代表性产地采集21个川芎药材,经浙江中医学院周大兴采集、鉴定为川芎的根茎,其中号为云南玉溪产,号四川灌县产,号湖北咸宁产,号江西九江产,! *号市场统货,21号市场购进的劣质货。
1.2 仪器及色谱操作条件
高效液相色谱仪:Agilent型,美国Agilent公司;色谱柱:Shimadzu VP-ODS,150mm×4.6mm,日本Shimadzu公司;流速0.5mL/min;进样量:20uL;紫外检测器:254nm;室温操作。线性梯度洗脱,流动相A为水,B为甲醇,梯度程序如下:min,B的体积百分比由0%增至6%;min,B的体积百分比由6%增至60%;min,B的体效力子体系是在效力进行的进程中触及的有关软件程序积百分比由60%增至90%;min,B的体积百分比由90%增至100%。双蒸水,甲醇为色谱纯;其余试剂均为分析纯。
1.3样品测定及其方法学考察
样品粉碎后,过200目筛,精密称取1g,分别用水30ml和20ml煮沸回另外一方面流提取2次,每次30min,合并提取液,定容至50ml,过0.45um的滤膜后,进样20ul,得色谱图。
连续5次进样,以图1(a)中.号峰为例,测定其峰面积值,得RSD为0.56%,其他峰的峰面积RSD均为 1%,保留时间RSD 5%,表明测定方法的精密度较好。
取同一样品5份,按前述方法分别提取后进样,以图1(略)(a)中7号峰为例,测定其峰面积值,得RSD为2.3%,其他峰的峰面积RSD均为 2.8%,保留时间 0.5%,表明测定方法的重复性较好。
1.4 数据处理
获取不同产地川芎药材样品的色谱图,采集图1所示15个共有色谱峰,计算峰面积百分比数据,结果存入计算机。数据处理采用matlab5.3软件,程序自编。
2、结果与讨论
2.1 主成分分析
只要把弹簧放进测试盘图2(略)是前两个主成分的得分图,图中每个点对应1个样品。由图知,云南玉溪产号、四川灌县产号以及湖北咸宁与江西九江产号药材样品分别聚集成类,表明这15个色谱指纹峰能较好地表征各产地川芎药材的差异。另外,号样品分布较聚集,提示云南玉溪产不同样品间化学组成差异可能相对较小;号样品较为分散,提示湖北咸宁产不同样品间化学组成差异相对较大。由图还知,号样品与湖北和江西产川芎药材样品较为相近,21号样品则与云南玉溪产川芎药材样品更接近。
2.2 聚类分析
图3(略)是21个样品的系统聚类谱系图。由图可知,云南玉溪产和四川灌县产药材各自聚为一类,而湖北咸宁产与江西九江产药材同聚为一类。市场统货号样品与湖北和江西产药材聚为一类,21号样品与云南玉溪产药材聚为一类,这与前述主成分分析结果一致。
2.3相似度计算
将号样品色谱图阻尼器中15个指纹峰的面积值分别计算平均值,组成云南玉溪产药材标准指纹图谱的数据矢量,并计算所有样品指纹图谱与该标准指纹图谱的相似度。同理,建立其它产地的标准指纹图谱,计算其与各样品指纹图谱间的相似度,结果见表1。
由表1知,同产地药材指纹图谱之间的相似度都在0.95以上,这表明相同产地川芎样品间相似程度较高。除湖北和江西产川芎指纹图谱之间相似度较高外,其余不同产地间药材指纹图谱相似度都在0.7以下。另外,由表1知,21号市场劣货与云南玉溪产药材标准指纹图谱相似度最大,接近0.9,推测可能产自云南。市场统货号的指纹图谱与湖北和江西产药材指纹图谱相似度均在0.95以上,需进一步鉴别。
2.4 Fisher因子分析
采用Fisher因子分析法进一步分辨湖北咸宁产和江西九江产川芎药材。Fisher因子分析法是主成分分析的一种改进方法,它在提取药材产地的Fisher 因子(Fisher factor,FF)时不仅考虑谱图中谱峰的变化因素,还考虑谱峰变化与药材产地的相关性,故特征提取能力更强。图4为前两个Fisher因子硅胶电线的得分图。由,在Fisher因子得分图中很容易区分两者,江西九江产川芎样本均在图左方,湖北咸宁产川芎样本则落在图右方。市场统货与湖北咸宁产药材聚在一起,推测它们可能产自湖北,这与市场统货的标示一致。
3 结论
本文将高效液相色谱法与模式分类技术相结合,形成一工信部将从今年开始继续制定和出台1系列产业增进政策和措施种鉴别川芎药材产地的色谱指纹图谱分析方法。研究结果表明,所得色谱图中的15个色谱峰可作为指纹特征,用于鉴别川芎药材的多个产地。
参考文献(略)
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